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細胞培養是一項非常重要的實驗技術，細胞培養到一定程度的時候必須借助細胞耗材方能達到細胞生長所需的條件，富道細胞為大家分享一下如何使用細胞培養瓶進行貼壁細胞傳代。

貼壁細胞細胞在培養瓶長成致密單層后，繼續生長的空間不足，培養基中的營養成份也消耗較多，同時代謝廢物也有較多堆積，需要分瓶培養，對細胞進行傳代擴增。

對于貼壁不太緊的細胞如293細胞，可以直接吹散后分瓶。而對于貼壁較緊的細胞如CHO，則需要以胰酶消化后再吹散分瓶，一般過程為 （以下操作均按無菌操作的要求進行）：

將長成致密單層細胞的細胞培養瓶中原來的培養液棄去； 加入0.25％胰酶溶液，視細胞培養瓶的大小加入體積為0.5ml或更多，以使充分浸潤； 一般消化時間約為1至3分鐘，肉眼觀察細胞培養瓶壁半透明的細胞層，當見到出現細針孔空隙時，棄去胰酶溶液，并加入適量的細胞培養液終止消化；視實驗要求分入多個細胞培養瓶繼續培養，一般為一傳二到一傳四的比例。

這里，胰酶消化的程度是一個關鍵：消化過度則對細胞的活性損傷較大，并有部分細胞漂浮，隨棄去的胰酶流失；消化不足則細胞難于從細胞培養瓶瓶壁上吹下，反復吹打同樣也會損傷細胞活性。 影響消化速度的因素較多，主要有胰酶溶液的活性（配制條件、凍存或4℃保存時間長短、是否反復凍融、化凍后存放時間及溫度等）、消化時的溫度（氣溫、細胞培養 瓶及胰酶溶液的溫度）以及所加胰酶溶液的多少等 。

這就是富道細胞為大家分享的如何使用細胞培養瓶進行貼壁細胞傳代，希望對大家有所幫助。