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細(xì)胞工廠發(fā)現(xiàn)污染的清除辦法
發(fā)表日期:2023-01-19

我們在使用細(xì)胞工廠培養(yǎng)細(xì)胞一經(jīng)污染,多數(shù)較難處理。若污染細(xì)胞價值較大,又難于重新得到,可采取以下辦法清除。

1、使用抗生素

抗生素對殺滅細(xì)胞工廠中細(xì)菌較有效。聯(lián)合用藥比單獨用藥效果好。預(yù)防用藥比污染后再用藥效果好。預(yù)防用藥一般用雙抗生素(青霉素100u/mL加鏈霉素100μg/mL),污染后清除用藥需采用大于常用量5~10倍的沖洗法,于加藥后作用24~48小時,再換常規(guī)培養(yǎng)液。此法在污染早期可能有效。所用抗生素品種除青霉素、鏈霉素外,還可用慶大霉素、卡那霉素、多粘菌素、四環(huán)素、制霉菌素等。常用400~800μg/mL卡那霉素或200μg/mL四環(huán)素處理,每隔2~3日換液1次,傳1~2代進(jìn)行治療。近年來有報道,4-氟,2-羥基喹啉(Ciprofloxacin,Cip)、截耳素衍生物(Pleu-romutilin derivative, BM-Cyclin2:BM-1和四環(huán)素衍生物(BM-2)等三種抗生素單用或合用對殺滅支原體有效。這三種抗生素均用PBS配成250X濃縮液,-20℃保存?zhèn)溆?,使用濃度Cip為10μg/mL,BM-1為10μg/mL,BM-2為5μg/mL。使用時先吸除污染的培養(yǎng)液,加入含BM-1的RPMI1640培養(yǎng)液,3天后再吸除培養(yǎng)液,加入含BM-2的RPMI1640培養(yǎng)液,培養(yǎng)4天,如此連續(xù)3個輪次,直至用33258熒光染色鏡檢證明已清除支原體后,再加正常培養(yǎng)液培養(yǎng)傳代3-4次。

細(xì)胞工廠發(fā)現(xiàn)污染的清除辦法_富道細(xì)胞

2、加溫處理

將污染的組織培養(yǎng)物放在41℃培養(yǎng)18小時,可殺死支原體,但對細(xì)胞有不良影響。所以在處理前要進(jìn)行預(yù)試驗,摸索能最大限度殺死支原體又對細(xì)胞影響最小的加熱時間。此法有時不可靠。若先用藥物處理后,再以41℃加溫處理效果更佳。

3、使用支原體特異性血清

用5%的兔支原體免疫血清(血凝效價1:320以上)可去除支原體污染,因特異抗體可抑制支原體生長,故經(jīng)抗血清處理后11天即轉(zhuǎn)為陰性,并且5個月后仍為陰性。但此法比較麻煩,不如用抗生素方便、經(jīng)濟。

4、其他方法

除了上述去除污染的方法外,還有動物體內(nèi)接種除菌法、巨噬細(xì)胞吞噬法、污染培養(yǎng)瓶中加溴尿嘧啶再用光照射的方法及過濾法等,但均較麻煩,且效果不確定。所以一旦支原體污染,除非有特別重要價值,一般均棄之重新培養(yǎng)。

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