細胞工廠是貼壁細胞培養經常會用到的一種耗材,在實驗過程中我們要實時掌握細胞的生長狀態,根據具體情況做出相關調整。可以通過MTT法對細胞的活性進行檢測,從而確定細胞生長情況。
MTT法又稱MTT比色法,是一種檢測細胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲臜并沉積在細胞中,而死細胞無此功能。二甲基亞砜(DMSO)能溶解細胞中的甲臜,用酶聯免疫檢測儀在570nm波長處測定其光吸收值,可間接反映活細胞數量。在一定細胞數范圍內,MTT結晶形成的量與細胞數成正比。該方法已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規模的抗腫瘤藥物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。它的特點是靈敏度高、經濟。

在檢測細胞工廠內細胞的活性之前,非常重要的一個步驟便是配制MTT。通常,此法中的MTT濃度為5mg/ml。因此,可以稱取MTT 0.5克,溶于100 ml的磷酸緩沖液(PBS)或無酚紅的培養基中,用0.22μm濾膜過濾以除去溶液里的細菌,放4℃ 避光保存即可。在配制和保存的過程中,容器盡量用鋁箔紙包住。
在利用MTT法測定細胞工廠內的細胞活性時要注意,MTT有致癌性,用的時候小心。這種方法只能用來檢測細胞相對數和相對活力,但不能測定細胞絕對數。在用酶標儀檢測結果的時候,為了保證實驗結果的線性,MTT 吸光度盡量在0-0.7 范圍內。
上一篇: 胎牛血清分裝到PETG血清瓶操作方法
下一篇: 細胞搖瓶培養靈芝對酸堿度及溫度的要求